C4d抗體臨床檢測(cè)意義
 
C4d 在腎小管周毛細(xì)血管的沉積可作為診斷抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)的重要依據(jù)，是抗體介導(dǎo)的移植腎損傷的標(biāo)志，與移植腎的預(yù)后相關(guān)，是腎失功獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。

受者人體循環(huán)中同種抗體和移植的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合是首要目標(biāo)。活的內(nèi)皮細(xì)胞可以通過帽化，脫落與 內(nèi)化快速消除來自細(xì)胞表層的結(jié)合抗體。

C4d 是補(bǔ)體因子C4激活后的裂解片段，是經(jīng)典補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)的成分，通過抗體與特異性的目標(biāo)分子 結(jié)合而啟動(dòng)。C4d檢測(cè)被看做是抗體排斥同種移植反應(yīng)的間接印證或者印記。在大多的文獻(xiàn)中都將 C4d看做是腎臟，心臟， 肝臟以及其他移植中的重要的指標(biāo)。

本產(chǎn)品用于定性分析人體活檢切片組織中C4d在腎小管周毛細(xì)血管的沉積

Anti C4d(BI-RC4D)
規(guī)格： 250μl/每瓶
形式： 液體IgG 片段，蛋白G 層析法純化
應(yīng)用： 人組織石蠟和冰凍 切片

Anti C4d, FITC 

規(guī)格：100μl/每瓶
形式: 液體IgG 片段，蛋白G 層析法純化
應(yīng)用： 流式細(xì)胞術(shù)
 
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
C4d多克隆抗體
可同時(shí)作用于石蠟切片和冰凍切片上

Frequently asked questions 常見問題

1. 對(duì)于C4d多克隆抗體，應(yīng)當(dāng)使用什么作為陽性控制？

陽性控制是有抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)的病例。證明抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)的就是來自同一樣品的冰凍切片上的陽性C4染色。或者是有抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)典型臨床表現(xiàn)且被Luminex技術(shù)證明或傳統(tǒng)交叉配型測(cè)試過的供者特異性抗體病例也可以
如果沒有明確的體液排斥反應(yīng)可以作為陽性控制，你可以使用膜性腎小球腎炎（自體腎或者TX）切片, C4d將會(huì)沿著腎小球基底膜（GBM Fig 1A）產(chǎn)生一個(gè)顆粒狀的染色模式，幾乎同由IgG(Fig 1B)產(chǎn)生的染色模式一樣. 有必要多測(cè)試幾個(gè)病例因?yàn)檠a(bǔ)體成分經(jīng)典途徑產(chǎn)生的沉積物在MGN(膜性腎小球腎炎)中是易變的。

2. C4d診斷相關(guān)的染色模式是什么？
  抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)的診斷相關(guān)的染色模式是沿著管周毛細(xì)血管（PTH Fig2A）的線性C4d沉積物.在最近的一項(xiàng)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)在管周毛細(xì)血管中不連續(xù)的粗糙顆粒狀的典型的病灶染色模式與抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)沒有關(guān)聯(lián)性。

3. C4d 沉積物在其他位置有什么意義？
  C4d沉積物在腎臟的不同腔室都可以發(fā)現(xiàn)。總的來說非管周毛細(xì)血管對(duì)抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)沒有診斷的相關(guān)性（除了腎小球內(nèi)皮細(xì)胞染色 Fig 3A）. 在動(dòng)脈和小動(dòng)脈壁上（Fig 2C, 箭頭跟三角形）很常見的可看到多變數(shù)量的C4d。例如在免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球腎炎匹配的其他補(bǔ)體（Fig 2D，箭頭和三角形）的分配與模式這樣許多的例子中可以找到腎小球C4d沉積物。此外在慢性移植腎小球病中也會(huì)發(fā)現(xiàn)腎小球C4d 沉積物。腎小球病中的C4d染色很明顯的會(huì)影響大部分甚至整個(gè)毛細(xì)血管壁（對(duì)比在一些抗體介導(dǎo)排斥反應(yīng)病例中發(fā)現(xiàn)的官腔型內(nèi)皮細(xì)胞染色模式）。腎小球病中的腎小球毛細(xì)血管壁染色模式經(jīng)常會(huì)聯(lián)想到在有內(nèi)皮沉積物的免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球腎炎中觀察到的染色模式。在很多病例中，其他補(bǔ)體成分的免疫組化和免疫球蛋白需要作出可靠的有差別的診斷。

4. C4d 多克隆抗體是否適用在免疫熒光法的冰凍切片上？
  是，C4d 多克隆抗體可以用在冰凍切片上，且染色結(jié)果等同于單克隆抗C4d抗體中觀察到的模式，但單克隆抗C4d抗體不適用與石蠟切片。

5. 理想的染色步驟是什么？

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室本身可以判斷何為理想的染色步驟。合理的是要從供應(yīng)商提供的C4d抗體開始染色步驟。熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)在大多實(shí)驗(yàn)室中都是必須的。一些公司會(huì)發(fā)現(xiàn)高壓修復(fù)要優(yōu)于微波修復(fù)。因?yàn)楹笳邥?huì)造成敏感性降低。但是這和其他染色細(xì)節(jié)仍然需要測(cè)試和根據(jù)實(shí)驗(yàn)室情況去調(diào)節(jié)。

6. 石蠟切片免疫組化的敏感度等同于冰凍切片免疫發(fā)光的敏感度嗎？
通過一些專門解決這個(gè)問題的研究得出結(jié)論：冰凍切片免疫熒光法總的來說比石蠟切片免疫組化的敏感度高。考慮這個(gè)情況，Banff 分類
 

7. 如果不能對(duì)切片采取高壓處理，是否有其他的方法處理切片？
其他的方法就是用微波修復(fù)抗原，由于我們對(duì)此種方法沒有驗(yàn)證過，客戶可以嘗試不同抗體稀釋方法來驗(yàn)證非特異性結(jié)合。

8. 工作步驟上面的參考信息是否使用抗體
所引用的參考信息的確使用了那種抗體。請(qǐng)看Link Literature Reference 或咨詢客服專員索取信息。

9. IgG的濃度是什么？
0.2mg/ml,純IgG,通過蛋白質(zhì)G純化， 無載體蛋白

10. 工作步驟中所給出的PBS 緩沖液僅僅就只是純PBS緩沖液嗎？是否包含BSA 或者一些蛋白質(zhì)在里面？
緩沖液只是純的PBS 溶液 10mM/PBS/140Mm NaCI ph7

11. 抗體是否會(huì)和狗發(fā)生交叉反應(yīng)？
總的來說C4d的活性在哺乳類的物種中比較保守。所以有很大的可能性在狗身上也會(huì)發(fā)現(xiàn)C4d.目前對(duì)于跟狗的交叉性反應(yīng)還不清楚。

12. H₂O₂ 封閉液是使用Superstain 還是其他的？
30% Fluka Hydrogen peroxide ,1:10 甲醛稀釋，室溫下10min(最終濃度3%)

13. 工作步驟上指出要用20mM的PBS—配方是什么？
20mMPBS 溶液要準(zhǔn)備200mM的原液
A: 5.244g NaH2PO4x1H2O+大概190ml aqua bidest, PH=7.4
B:28.83g Na2HPO4x2H2O+大概810ml aqua bidest, PH=7.4
混合A和B,PH控制7.4， 添加到1L工作液中， 在0.9% NaCi中稀釋原液1:10

14. 用Harris 蘇木精復(fù)染會(huì)出現(xiàn)問題嗎？
用Harris 蘇木精復(fù)染不會(huì)有問題。反應(yīng)產(chǎn)品穩(wěn)定， 你需要相應(yīng)的優(yōu)化復(fù)染時(shí)間（使用你常用的石蠟切片）

15. 有沒有可能每次沖洗5min?
是，最少要5min的沖洗時(shí)間。 你應(yīng)當(dāng)更換PBS溶液4次。